前言：2012細(xì)胞治療技術(shù)研討會(huì)將于2012年6月1日~2日在羊城廣州召開。
細(xì)胞治療作為一種新型的人類疾病治療手段，它克服了臨床常規(guī)治療的局限性，為人類疾病的治療打開了全新的思路，展示出廣闊的應(yīng)用前景。但是，細(xì)胞治療是目前最復(fù)雜的生物療法，有許多的技術(shù)難點(diǎn)尚未突破，特別是臨床應(yīng)用的有效性和安全性依然是目前關(guān)注和爭論的焦點(diǎn)。
此次研討會(huì)貫徹基礎(chǔ)研究與臨床治療密切結(jié)合的原則，將重點(diǎn)介紹細(xì)胞治療領(lǐng)域的研究前沿及最新技術(shù)，如: 腫瘤的樹突狀細(xì)胞（DC）治療、T細(xì)胞過繼免疫治療、干細(xì)胞移植治療、基因修飾化細(xì)胞治療、微囊化細(xì)胞移植治療等。
此外，針對(duì)行業(yè)中缺乏操作標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，技術(shù)及產(chǎn)品質(zhì)量控制等問題，會(huì)議將邀請(qǐng)相關(guān)專家就“細(xì)胞治療安全，細(xì)胞制品質(zhì)量控制，臨床治療規(guī)范化管理”等內(nèi)容進(jìn)行報(bào)告并展開討論，以促進(jìn)行業(yè)健康發(fā)展。
以下是本次研討會(huì)的部分嘉賓的演講摘要，更多相關(guān)資訊可關(guān)注生物谷會(huì)議官方微博（@生物谷會(huì)議），或登錄會(huì)議官網(wǎng)：2012細(xì)胞治療技術(shù)研討會(huì)
學(xué)習(xí)新版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》強(qiáng)化體細(xì)胞治療的質(zhì)控
去年衛(wèi)生部發(fā)布了97號(hào)令，有關(guān)新版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(以下簡稱藥品GMP)。它是歷經(jīng)5年修訂、兩次公開征求意見而完成的。新版藥品GMP吸收了國際先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合我國國情，按照"
體細(xì)胞的制備與新版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》或制藥有什么關(guān)系？因?yàn)轶w外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)（未經(jīng)培養(yǎng)的血細(xì)胞、骨髓細(xì)胞不在內(nèi)），就要使用培養(yǎng)基、細(xì)胞因子等，需要GMP凈化間，需要有標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）和產(chǎn)品的質(zhì)控，這些和制藥沒有本質(zhì)上的區(qū)別。經(jīng)過培養(yǎng)的細(xì)胞可能被活化、或改變性質(zhì)和功能,因此，終產(chǎn)品需要證明其安全性和有效性。因此，學(xué)習(xí)藥品GMP對(duì)于體細(xì)胞制劑的質(zhì)控是十分必要的。 去年年底我國衛(wèi)生部國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了衛(wèi)辦科教涵1177號(hào)"關(guān)于開展干細(xì)胞臨床研究和應(yīng)用自查自糾工作的通知"。已叫停未經(jīng)衛(wèi)生部和SFDA批準(zhǔn)的干細(xì)胞臨床研究和應(yīng)用。這也是我國開展體細(xì)胞臨床研究的良好開端。體細(xì)胞的研究和應(yīng)用僅僅是開始，問題較多，但其發(fā)展?jié)摿艽?，尤其在腫瘤，傳染病，以及再生醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用前景廣闊。相信我國的科技工作者和管理者攜手，加速科學(xué)的體細(xì)胞臨床研究，一定會(huì)造福于百姓，并走到國際的前列。 [生物谷專訪]張叔人：整頓是干細(xì)胞療法發(fā)展的良好開端 基因修飾DC的臨床治療 樹突狀細(xì)胞（dendritic cell, DC）為一種骨髓來源的抗原提呈細(xì)胞（antigen-presenting cell, APC），它在免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)和調(diào)控中發(fā)揮重要作用，為T和B細(xì)胞免疫反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控者。DC作為免疫反應(yīng)的關(guān)鍵"決策細(xì)胞"，它是對(duì)免疫系統(tǒng)進(jìn)行治療性操作以增強(qiáng)針對(duì)腫瘤抗原的免疫反應(yīng)的理想靶點(diǎn)之一。在腫瘤疫苗的研究中，DC常作為一種"天然佐劑"來誘導(dǎo)腫瘤抗原特異性效應(yīng)和記憶性細(xì)胞。自從1996年美國斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)中心Hsu等在Nature Medicine上報(bào)道了全球首項(xiàng)DC腫瘤疫苗臨床研究以來，基于DC的腫瘤免疫治療方法一直處于研究中，一系列臨床研究正在進(jìn)行中或已經(jīng)完成。目前全球范圍內(nèi)已經(jīng)有3支DC腫瘤疫苗獲得了上市批準(zhǔn)：sipuleucel-T（Dendreon，美國）、CreaVaxRCC（CreaGene，韓國）和Hybricell（Genoa Biotechnologia，巴西），DC腫瘤疫苗已經(jīng)由實(shí)驗(yàn)室走上臨床，其可行性和安全性以及對(duì)部分患者的有效性已經(jīng)得以證實(shí)，但從總體上來看，DC腫瘤疫苗誘導(dǎo)的臨床反應(yīng)仍有限，受制于DC的成熟度、與臨床反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)、外源性負(fù)載的表位數(shù)量較少等因素，這表明傳統(tǒng)DC腫瘤疫苗功能可能需要進(jìn)一步改進(jìn)，而基因修飾的表達(dá)腫瘤抗原和增強(qiáng)免疫反應(yīng)的免疫刺激分子、細(xì)胞因子或趨化因子以及下調(diào)免疫負(fù)調(diào)控分子（如SOCS1等）的DC將有助于這些問題的解決。10多年的臨床前研究和臨床研究已經(jīng)證實(shí)單純基因修飾DC治療或它與其他治療手段聯(lián)合治療的安全性和有效性，它將是未來DC腫瘤疫苗發(fā)展的一個(gè)重要方向，尤其是應(yīng)用于常規(guī)治療手段后的微小殘留病灶的輔助治療或與其他抗腫瘤或免疫增強(qiáng)治療手段的聯(lián)合治療。 體細(xì)胞免疫治療及聯(lián)合腫瘤常規(guī)治療的基本原則 體細(xì)胞免疫治療指向腫瘤患者輸入具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞，直接殺傷腫瘤細(xì)胞或激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。常用的體細(xì)胞免疫治療方法包括：樹突狀細(xì)胞疫苗（DC ）、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞 （CIK）、DC刺激的CIK細(xì)胞（DC-CIK）、半合子DC刺激的CIK細(xì)胞（半合子DC-CIK）及自然殺傷細(xì)胞（NK）等。DC是已知機(jī)體內(nèi)抗原呈遞能力最強(qiáng)的細(xì)胞，通過對(duì)腫瘤抗原的攝取及抗原提呈，可有效地誘導(dǎo)及活化免疫效應(yīng)細(xì)胞，從而介導(dǎo)強(qiáng)大的特異性腫瘤免疫。CIK細(xì)胞是將人的外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子共同培養(yǎng)一段時(shí)間后獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞，又被稱為NK細(xì)胞樣T淋巴細(xì)胞，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活性和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點(diǎn)。DC-CIK指通過體外誘導(dǎo)有功能的自體DC細(xì)胞，將這種有功能的自體DC細(xì)胞激活自體CIK< /SPAN>細(xì)胞，產(chǎn)生一種更強(qiáng)的抗腫瘤的效應(yīng)細(xì)胞，從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。NK細(xì)胞來源于造血細(xì)胞，它們不依賴抗原刺激作用，就可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞，因此，在機(jī)體免疫監(jiān)視和早期抗感染免疫過程中起重要作用。半合子DC-CIK 指從患者體內(nèi)分離培養(yǎng)CIK細(xì)胞，再從患者子女體內(nèi)分離培養(yǎng)DC，兩者混合后回輸給患者。體細(xì)胞免疫治療聯(lián)合腫瘤常規(guī)治療的基本原則是根據(jù)不同腫瘤的生物學(xué)特性、患者的遺傳背景、目前的病情狀況、前期治療方法、年齡等，在傳統(tǒng)腫瘤治療模式的基礎(chǔ)上，制定出適合病人的個(gè)體化體細(xì)胞免疫治療方案。體細(xì)胞免疫治療可以作為綜合治療的一部分, 在腫瘤負(fù)荷降低后接受治療；還可聯(lián)合細(xì)胞因子、抗腫瘤抗體、生物靶向藥物以取得更好的療效。 腫瘤的細(xì)胞免疫治療：現(xiàn)狀和未來 美國FDA于2008年12月，我國衛(wèi)生部也于2009年5月正式批準(zhǔn)DC誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫治療應(yīng)用于臨床。2011年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)?lì)C發(fā)給了DC以及DC誘導(dǎo)腫瘤免疫的發(fā)現(xiàn)者，蒙特利爾大學(xué)的Ralph M. Steinman教授，以表彰他在腫瘤免疫治療領(lǐng)域的巨大貢獻(xiàn)。美國NIH預(yù)言，細(xì)胞治療可能會(huì)成為"能夠徹底治愈腫瘤的唯一手段"。隨著DC誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫治療的基礎(chǔ)、臨床前、和臨床研究的快速發(fā)展，細(xì)胞免疫治療已經(jīng)成為繼手術(shù)，放療、化療之后的第四大腫瘤治療模式。美國NIH報(bào)告應(yīng)用TIL對(duì)惡黑進(jìn)行治療，總體有效率高達(dá)72%，令世界廣泛關(guān)注。國內(nèi)各大中型三甲醫(yī)院多已開展DC-CIK細(xì)胞免疫治療，并獲得明顯高于化療的臨床有效率（大約40%～45%）。 以美國NIH的Rosenberg教授為代表的TIL細(xì)胞免疫治療，采用了細(xì)胞回輸前預(yù)處理（preconditioning）和大劑量IL-2的應(yīng)用，使臨床療效大幅度提高，但不同的預(yù)處理方法，特別是大劑量IL-2的應(yīng)用，帶來了不同程度的副反應(yīng)。我國大多應(yīng)用DC-CIK方法，但存在效應(yīng)細(xì)胞在體內(nèi)存留時(shí)間短、免疫一過性、客觀有效率低等臨床問題。有研究探討應(yīng)用腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)染特定基因至DC，激活制備特定的抗原特異性CTL，過繼回輸治療該特定抗原高表達(dá)的腫瘤，雖然特異性增強(qiáng)，但腫瘤譜縮窄。有研究探討臍血來源的DC和T細(xì)胞，擴(kuò)增和制備DC-CIK進(jìn)行臨床治療，但行政準(zhǔn)入尚未完善。也有研究探討轉(zhuǎn)染抗原特異性TCR，或輕鏈和重鏈抗原嵌合體受體（CAR）至T細(xì)胞，獲得了12%～30%的有效率。但無論何種方法制備的效應(yīng)細(xì)胞，過繼回輸后都會(huì)面臨同樣的問題：腫瘤微環(huán)境的免疫抑制因素，使過繼回輸?shù)男?yīng)細(xì)胞在體內(nèi)存留時(shí)間短、免疫呈一過性，免疫記憶細(xì)胞難以發(fā)揮持續(xù)的免疫激活，最終導(dǎo)致臨床療效有限，以及預(yù)處理和輔助用藥帶來的副反應(yīng)等，仍是目前困擾臨床的主要問題。 我們的臨床經(jīng)驗(yàn)表明，根治手術(shù)后非帶瘤狀態(tài)患者，以防止復(fù)發(fā)、爭取根治為治療目標(biāo)，術(shù)后盡早實(shí)施2～3個(gè)療程的細(xì)胞免疫治療，然后進(jìn)行1～2個(gè)療程的系統(tǒng)化療，使復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率顯著降低。帶瘤狀態(tài)的晚期腫瘤患者，以控制腫瘤進(jìn)程、改善生存質(zhì)量、延長生存期為治療目標(biāo)，應(yīng)采取綜合治療理念，在保證生存質(zhì)量的前提下，首先應(yīng)用腫瘤微創(chuàng)治療技術(shù)減低腫瘤負(fù)荷，然后實(shí)施細(xì)胞免疫治療。我們的理念是"干擾腫瘤微環(huán)境、打破腫瘤免疫耐受基礎(chǔ)上的個(gè)體化、特異性細(xì)胞免疫治療"，能夠有效的提高客觀有效率和總體有效率。 今后的挑戰(zhàn)在于：如何選用初始T細(xì)胞制備效應(yīng)細(xì)胞，如何選用特定的T細(xì)胞亞群制備效應(yīng)細(xì)胞，單克隆抗體聯(lián)合細(xì)胞過繼回輸治療的探討，新型基因工程載體的研發(fā)和應(yīng)用，輔助用藥的改良，以及如何減低臨床副反應(yīng)等。 IL-15選擇性轉(zhuǎn)染特異性CD4+T細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移治療腫瘤 數(shù)十年來，腫瘤治療取得了較大的進(jìn)展，但仍然面臨困境：手術(shù)治療對(duì)微小癌灶、轉(zhuǎn)移癌灶束手無策；放化療對(duì)正常細(xì)胞和癌細(xì)胞區(qū)分不夠，毒副作用較大。因此，靶向性強(qiáng)、副作用小的免疫療法受到人們的廣泛關(guān)注。越來越多的研究表明：CD4+T細(xì)胞可發(fā)揮重要的抗腫瘤免疫作用，其應(yīng)用于過繼轉(zhuǎn)移治療腫瘤的前景也為人們所看好。但是，受困于無法短時(shí)間內(nèi)獲得大量腫瘤特異性細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移應(yīng)用于臨床腫瘤治療受到限制。大量擴(kuò)增腫瘤特異性CD4+T細(xì)胞意義重大。 我們開展了IL-15基因體外轉(zhuǎn)染CD4+T細(xì)胞后過繼轉(zhuǎn)移治療腫瘤的研究，具體包括以下三個(gè)方面的工作：構(gòu)建pTK-IL15逆轉(zhuǎn)錄病毒載體并成功轉(zhuǎn)染CD4+T細(xì)胞，該載體攜帶人IL-15基因以及自殺基因胸苷嘧啶激酶（TK）；測試IL-15轉(zhuǎn)染抗原特異性CD4+T細(xì)胞的效率；通過動(dòng)物模型檢測了該療法抑制腫瘤生長的效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在體外T細(xì)胞培養(yǎng)過程中，IL-15轉(zhuǎn)染可選擇性擴(kuò)增抗原特異性CD4+T細(xì)胞。其作用機(jī)制如下：抗原特異性CD4+T細(xì)胞在體外抗原刺激作用下，處于增殖活躍狀態(tài)，更易被逆轉(zhuǎn)錄病毒所轉(zhuǎn)染，實(shí)現(xiàn)了IL-15對(duì)抗原特異性CD4+T細(xì)胞的選擇性轉(zhuǎn)染；IL-15轉(zhuǎn)染后降低CD4+T細(xì)胞FasL表達(dá)水平，阻斷Fas/FasL介導(dǎo)的T細(xì)胞凋亡，加強(qiáng)特異性CD4+T細(xì)胞的存活。通過動(dòng)物模型我們進(jìn)一步證實(shí)了轉(zhuǎn)染IL-15的CD4+T細(xì)胞可在荷瘤小鼠體內(nèi)抵抗凋亡，與IL-15細(xì)胞因子體外培養(yǎng)的CD4+T細(xì)胞相比具有更好地抑瘤效應(yīng)。通過構(gòu)建TK基因于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體上，實(shí)現(xiàn)了GCV對(duì)基因轉(zhuǎn)染CD4+T細(xì)胞的選擇性有效清除，從而確保了本療法的安全性。 我們的研究結(jié)果第一次證實(shí)轉(zhuǎn)染IL-15的抗原特異性CD4+T細(xì)胞在體外具有增殖優(yōu)勢，在體內(nèi)可有效抑制腫瘤生長。上述研究成果將推動(dòng)CD4+T細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移在臨床腫瘤治療中的應(yīng)用。 主辦：中國醫(yī)師協(xié)會(huì) 承辦：生物谷 合作單位：廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院
